基金项目:北冬虫夏草瓶栽栽培技术及品质标准
基金项目甘肃省教育厅项目循环农业模式下几种食用菌栽培关键技术研究及推广(2015A-207);兰州市科技局项目蛹虫草人工栽培关键技术研究及推广(2016-3-2);兰州市人才创新创业项目几种食(药)用微生物重离子辐照及诱变育种(2015-RC-21)。
北冬虫夏草是虫草属模式种,又名蛹虫草、北虫草,是一种药用真菌,与冬虫夏草同属不同种,其主要药用成分虫草菌素、虫草酸、虫草多糖等均高于冬虫夏草,而且比冬虫夏草更易于人工栽培。早在1986 年就实现了人工栽培,并在实践过程中创造了多种栽培模式。
当前北冬虫夏草主要的人工栽培模式有2 种,一种是以活的蚕蛹作培养基的虫体模式;一种是利用大米、小麦等作培养基的代料栽培模式。本文总结北冬虫夏虫代料栽培法,以实现北冬虫夏草的规模化生产。
1 栽培场所和季节选择
北冬虫夏草栽培场所要求周边环境干净无污染源、水电方便。培养室可以选用通风好、光照适宜的空置房屋或大棚。为了充分利用空间,在棚、室内搭建层架,每个层架的宽度为30 cm,能卧式摆放2 个750 mL 的罐头瓶;层距50 cm左右,太高栽培瓶放置不稳固;层架长度以有效利用空间为宜,一般每个层架长度不超过1.5 m;每个层架最高不超过5 层[吉山花瑶]。
根据自然温度,在我国北方,春、秋2 季是适宜的栽培季节。春季2—3 月、秋季8—9 月栽培。若安装空调、加湿器等设备则全年均可栽培。
2 菌种选择及制作
2.1 菌种选择
北冬虫夏草菌种退化很快,常规保存3~6 个月,传代超过3~4 次,菌种性能就会严重退化导致栽培中出现不稳定性,因此生产上使用的母种一般都是向权威研究机构购买,扩培繁殖3 代使用栽培后就得再次重新购买。不可随意使用通过子实体组织分离等方法获得的菌种,以免给生产带来巨大风险,甚至是不可挽回的损失。符合栽培条件的菌种为菌丝紧贴培养基生长、颜色洁白、边缘整齐、无明显绒毛状白色气生菌丝、无杂菌感染,这样的菌种抗逆性强,出草整齐,产量高。常用北冬虫夏草菌种的特点如表1 所示。
表1 北冬虫夏草栽培菌株品种特征
2.2 生产用菌种的制作
规模化生产最好用液体菌种,以保证接种迅速,不易感染杂菌,同时具有接种面大且均匀、后期出草整齐、菌丝立体式占领料面等诸多优势。液体菌种可以在生产前直接找正规厂家购买,也可以自己购买权威研究机构的母种进行制作。
2.2.1 营养液的配制。准备葡萄糖2%、蛋白胨0.5%、可溶性淀粉3%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.2%、VB1 10mg,水100mL。取100 mL 水,煮沸后加入可溶性物质,再将可溶性淀粉调成糊状缓慢加入,最后用5%氢氧化钠调pH 值至6.5。以500 mL 罐头瓶为容器,加入营养液100 mL,摇瓶用的玻璃珠10 个左右,123 ℃下灭菌25~30 min 即可[2]。
2.2.2 液体菌种的接种与培养。营养液冷却后,无菌条件下在接种箱内用购买母种接种。一般每管母种可接种8~10 瓶液体菌种。接种后将液体菌种放置在20~25 ℃避光环境中静置培养24~48 h,再移至摇床上震荡培养,旋转式摇床一般将转速调至130~140 r/min,7 d 左右可以看到直径2 mm的菌丝球均匀布满营养液。液体菌种不能放置时间太长,因此长好的菌种7~10 d 内使用最佳。
3 栽培管理
3.1 栽培料及组成
培养基的基本成分是大米、小麦、酵母等,另外还可添加蚕蛹粉、蛋清、奶粉等动物性营养成分,可提高北冬虫夏草的产量和质量。工厂化生产时可先在每个栽培瓶(罐头瓶,规格750 mL 或500 mL)装固体料30~25 g,再加营养液60~65 mL。其配料及装瓶量见表2、3。
表2 北冬虫夏草栽培1 000 mL 营养液配方 〔g〕
注:上述配方中再各加入VB1和VB6各20 mg。
表3 北冬虫夏草栽培每瓶装瓶量
3.2 装瓶与灭菌
装瓶后用0.05 mm 厚的聚丙烯塑料薄膜封口,用橡皮圈或细绳扎紧。采用高压蒸汽灭菌,温度123 ℃,时间1 h;常压蒸汽灭菌,温度100 ℃,时间8 h。培养基灭菌后的米粒不烂而松软透气。若水分过多,培养基太湿,菌丝不易吃透整个培养基,造成杂菌污染。如果太干,菌丝生长缓慢,瓶内小气候干燥,菌丝纤细无力,难以转色出草。
3.3 接种及发菌管理
在无菌条件下,打开封口膜,用消毒好的接种枪将液体菌种均匀喷在培养基上,接种量为10~15 mL。接种后在20~22 ℃温度条件下,避光情况下将栽培瓶直立放置培养24~48 h,待菌丝萌发并定植后,摆放在培养架上培养。否则,培养液、培养基或菌液会倒向一侧,后期出草不齐。菌丝萌发栽培瓶上架后即进入发菌管理期。
由于北冬虫夏草具有趋光性,在摆放时要将瓶口朝向光源一侧,一般以瓶口朝外侧卧式摆放为宜,每层架上摆放5 层菌瓶,层架之间设置日光灯补充光照。发菌初期,室内温度宜保持在15~18 ℃,可减少杂菌污染;15~20 d 菌丝长满料层后,将温度调节到20~23 ℃,继续培养。此阶段湿度保持在65%~70%之间,通风量以保证培养室内空气清新为度。菌丝生长阶段不需要光线,观察到菌丝长满吃透培养料后,需要进行照光以刺激菌丝由营养生殖进入生殖生长,但不能照光过早,以免影响产草量[4]。
3.4 转色管理
经15~20 d,白色菌丝布满料面,培养基表面(气生菌丝)出现一些小隆起时需要增加光照,促进转色[5-6]。白天利用自然散射光,光照强度为100~200 lx,光线不足可用日光灯做补充光源,每天光照时间不少于10 h,温度21~23 ℃,相对湿度75%,同时用针在封口膜上刺10 个左右的小孔以利于气体交换,5~7 d 即可在培养基上出现米粒状原基并转成橘黄色。注意转色完成后要停止人工光照,连续光照会导致子座不容易长出。
3.5 出草管理
温度控制在18~22 ℃之间,不能超过28 ℃,否则不能形成子座;加大温差刺激,白天室温控制在18~22 ℃之间,晚上室温降到8~10 ℃,每天低温刺激6~10 h。每天通风2~3 次,每次30~60 min,后期出草量大,呼吸增强,通风时间适当延长;空气相对湿度在80%~90%之间,光照每天12 h 以上,强度200~500 lx。若通风差、光照强,则原基分化密,严重时形成菌被,不长子座[9]。
3.6 采收加工
经过15 d 左右,子座长出表面,高度2~8 cm,直径2~5 mm,整个子座呈橘红色或橘黄色时,顶部出现龟裂状花纹,表面可见黄色粉末状物表明已经成熟,即可采收。采收后,停水3~4 d,在瓶内注入营养液,10~20 d 后可长出第2 批。采收后,除鲜售外,一般烘干包装。
4 北冬虫夏草商品品质标准
4.1 鲜品
子实体长短较一致,结实干净、颜色金黄、分布均匀,表面无白色菌状物、未沾染金黄色以外的其他颜色,为上品。若表面有白色菌状物则说明老化,沾染金黄色以外的其他颜色说明感染杂菌,为不良品。
4.2 干品
形状特征:结实、粗细长短均匀、单枝顶端无分叉、破碎率低,为上品。颜色:金黄色、橘黄色,颜色均匀,为上品,褐色、黑色不能食用。气味:北冬虫夏草子实体有独特的腥味,腥味越重,品质越高。含水量:含水量12%以内,判断办法是用手轻捏子实体,有将断未断感觉。吉山花瑶